Главная Наукоград ПНЦ Учёные ИТЭБ РАН предложили измерять активность ДНК-полимеразы по-новому

soobshchite-o-probleme-glave

Главное меню

Задать вопрос главе города Пущино

Телефонная "горячая линия" для связи населения с Главой города

+7(4967)73-49-88

Дежурная служба Администрации

logo obrez-ыфше

Banner remont dorog 2017

РИА новости

logo

Круглосуточный телефон горячей линии «Дети в беде» Комиссии по делам несовершеннолетних и защите их прав города Пущино:

8-916-459-67-98

ЭМБЛЕМАУТВЕРЖДЕННАЯ ВЕКТОР

6682b357fd7029350545f461ab1b0de2

a0cc497fde27cda434014ff7a4e098b8

call center predrinim

Учёные ИТЭБ РАН предложили измерять активность ДНК-полимеразы по-новому

DNK

Пущинские ученые разработали экспресс-метод для измерения активности ДНК-полимераз. ДНК-полимераза – это фермент, который синтезирует ДНК из «строительных блоков» – дезоксирибонуклеотидтрифосфатов (дНТФ), используя в качестве шаблона родительскую цепь.

К настоящему моменту существуют несколько методик, позволяющих измерять этот параметр. Почти все они основаны на подсчёте дНТФ, которые полимераза за определенный отрезок времени способна соединить друг с другом на матрице одноцепочечной ДНК. Чтобы осуществить этот подсчет, дНТФ метят либо флуоресцентной, либо радиоактивной меткой.

Одна из стратегий для дальнейшего исследования – осаждение ДНК на стекловолокне, нитроцеллюлозе или хроматографической бумаге. Во избежание перекрестного загрязнения, часть последующих манипуляций необходимо проводить в отдельных пробирках, с использованием дорогостоящей установки, в результате на инкубацию, промывку и высушивание дисков затрачивается около часа.

Сотрудницы ИТЭБ РАН Надежда Зырина и Валерия Антипова модифицировали описанный выше метод кислотной преципитации ДНК для измерения активности ДНК-полимеразы.

Они предложили использовать вместо индивидуальных дисков тест-полоски, длиной 20 – 24 см и шириной 2,5 см, выполненные из GF/C стекловолокна. Этот материал выбрали за его большую прочность и в то же время эластичность. На этой полоске вырезают зубцы, на которые впоследствии наносят пробы фермента. Один из углов тест-полоски обрезают, чтобы не помечать каждую индивидуальную пробу – можно просто записать отдельно порядок нанесения проб относительно отрезанного уголка. При этом устраняется опасность того, что при промывках с фильтра сотрётся отметка. Обработку всех проб на тест-полоске можно проводить одновременно, в одном химическом стакане, без специального оборудования, необходимого при использовании классического метода, описанного выше. Итого, на обработку 12 проб затрачивается около 12 – 15 минут.

– Благодаря уникальным свойствам ДНК-полимеразы активно применяют в науке и медицине, например, реакция ПЦР – самый быстрый и точный способ постановки диагноза множества инфекционных заболеваний, невозможна без полимеразы, – прокомментировал предложение учёных ИТЭБ РАН Денис Буцаев. – Поскольку отпадает необходимость в дорогостоящей установке, метод становится более доступным для исследователей, а также позволит экономить время и деньги. Авторы работы полагают, что их новация несомненно вызовет интерес широкого круга ученых, и мы согласны с этим, – добавил куратор инновационного блока Подмосковья.

Однозначный плюс этого метода – поскольку меньше реактивов расходуется на работу с радиоактивно мечеными образцами, после опыта нужно утилизировать меньшее количество радиоактивных отходов. Экономия времени и реактивов, а также уменьшение объёма утилизируемых отходов позволяют значительно уменьшить стоимость каждого эксперимента.

– Особенно удобно использовать подобные тест-полоски, если нужно работать с большим количеством проб, – рассказывает один из авторов этой работы, научный сотрудник лаборатории рентгеноструктурного анализа Надежда Зырина, – данный метод разработан для скрининга большого количества образцов, которые, как правило, представляют собой, либо лизаты микроорганизмов, либо фракции с колоночной хроматографии. В то же время, при работе с ДНК-полимеразой мы остаемся в рамках стандартной методики оценки полимеразной активности на основе осаждения кислотонерастворимого полимера, принятой в практике крупнейших фирм-производителей ДНК-полимераз.

Авторы проверили эффективность метода на Bst-полимеразе, приобретенной на фирме New Englang Biolabs. Разница в измерениях активности этой полимеразы классическим методом и экспресс-методом с использованием тест-полоски оказалась в пределах погрешности.

Подготовила пресс-служба ИТЭБ-РАН

 

Поиск по сайту

Ближайшие события

Нет предстоящих событий.

Куда сходить в Пущино?

Городские мероприятия

Dobrodel

priem

200x200

Госадмтехнадзор

gatn

h867ve5cu7brtue57

gusn

EDIN54g4554b45b74

web 2

Случайное фото

eror

Заметили ошибку, опечатку, нерабочую ссылку?

Выделите текст с ошибкой, затем нажмите сочетание клавиш Shift + Enter и отправьте нам сообщение. Мы исправим ошибку в кратчайшие сроки.

f4gvybn7mink

112

стрелка

240 400

Яндекс.Метрика